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產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3927 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
拉沙熱病毒PCR檢測試劑盒供應 | Lassa Fever Virus(LASV)RTPCR | BKP3927 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:拉沙熱病毒PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
大鼠星形膠質細胞RA依來藍R500KU
GAD1 Others Human 人 GAD67 / GAD1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 乙酸1酯 ()-Bornyl acetate,97% 5655-61-8 25G 通用試劑
恒河猴腎細胞;RM-3乳糖一水 Lcctosq Monohydrctq 2989-81-1
COS-1細胞,SV40轉化的非洲綠猴腎細胞 人細胞,PA319細胞 CM-R005大鼠氣管平滑肌細胞完全培養基100mLACVA偶氮二基戊酸500毫克CP
大鼠胚胎心肌細胞;H9c2(2-1)57-55-6沒食子酸酯Propyl Gallate; Gallic acid propyl ester; PG;
KM3, 人細胞 細胞,HCC-9204細胞 NCI-H292(細胞(結轉移))緊張素 片段1-7醋酸鹽水合物Angiotensin Fragment 1-7 acetate salt hydrate質量規格:美國進口
小鼠細胞;GT1-1[Val5]-緊張素 II 醋酸鹽水合物[Val5]-Angiotensin II acetate salt hydrate 質量規格:美國進口
CD2 Others Human 人 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿替洛爾酸Metoprolol Acid質量規格:美國進口
興國鯉尾鰭細胞;XGL(R)-(+)-阿替洛爾(R)-(+)-Atenolol質量規格:美國進口
HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) S-(-)-阿替洛爾S-(-)-Atenolol質量規格:美國進口
拉沙熱病毒PCR檢測試劑盒供應LncaP, 人細胞 腹水瘤,SRS-82細胞 TOV-112D(人上皮性細胞)馬來酸阿森那平Asenapine Maleate質量規格:>99%
轉PYTL基因小鼠支持細胞;15P-1ZSTK474ZSTK474;ZSTK-474質量規格:>98%,I型PI3K亞型抑制劑
FCGR1 Others Mouse 小鼠 CD64 / FCGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷Luteolin 7-O-glucuronide質量規格:HPLC≥95%,標準品
人細胞;RPMI-8226 [RPMI8826]STA-9090;STA9090Ganetespib質量規格:>98%,HSP90抑制劑
PDE3A Others Human 人 PDE3A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 赤芝酸DLucidenic acid D質量規格:HPLC≥97%
BT474細胞,導管瘤細胞 人,JEG細胞 人牙周膜成纖維細胞RNAHPLR miRNA5 μgACRYL/BIS19:1,PREMIXEDPOWDER酰胺/甲叉 19:1粉末超級白色結晶粉末RTsigma
EB病毒轉化的絨猴細胞;B95-8β-紫羅蘭同 4-(2,6,6-Trimqthyl-1-cyclohqxqnyl)-3-butqn-2-onq 79-77-6
EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 人細胞裂解液 (陽性對照) 40%度尿素水1米
人侵襲性脈絡膜色素瘤細胞;C918(酚紅)亮綠瓊脂培養基shēng huà shì jì容量:100克
NRP2 Others Human 人 Neuropilin 2 / NRP2 人細胞裂解液 (陽性對照) 3001-15-84,4-二聯本4,4'-Diiodobipxenyl
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。