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上海帛科生物技術有限公司
   
     
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犬鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:BKP7225
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發布日期: 2020-06-24
  • 更新日期: 2025-03-14
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 帛科
貨號 BKP7225
用途 公司產品僅用于科研
包裝規格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進口

熒光定量PCR服務:
簡介:實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請提供已知的全長基因序列。
03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
產品僅供科研使用熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA
03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費標準:
 
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環數的遞增,PCR產物不斷積累,熒光信號也會相應的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。

產品名稱

英文名稱

貨號

犬鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Streptococcus canis

BKP7225

使用方法:
一、犬鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標記6個離心管,分別為765432
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10.
如果只做1次重復,則標記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加23倍。
11.
產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

實驗過程:
產品僅供科研使用一、試劑準備
1. DNA
模板
2
.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATPdCTPdGTPdTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93預變性3-5min,進入循環擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環30-35次,zui后在72 保溫7min
3
.結束反應,PCR產物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1
Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領域。

EFNB2 Protein Canine 重組狗 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (Fc 標簽)2-氨基-4'-氯二苯甲酮質量規格:大于98%,化學2-amino-4'-chlorobenzophenone

U-87 MG(人神經細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠樹突狀細胞細胞;DCS原百部堿(標準品)質量規格:HPLC98%,標準品Protostemonine

人小氣道上皮細胞裂解物HSAEpiCL雪上一枝蒿甲素質量規格:標準品,用于含量測定Bullatine A

CTF1 Others Human Cardioophin-1 / CTF1 人細胞裂解液 (陽性對照) 麥冬皂苷D' 質量規格:HPLC98%,標準品ophiopogonin D'

小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)紫杉醇質量規格:美國進口2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)paclitaxel
綿羊皮膚細胞;OAR-S1 小鼠原成骨細胞,MC3T3-E1 Subclone 14細胞 TM3細胞,正常小鼠Leydig細胞L-苯丙氨醇 質量規格:>98%,BRL-Phenylalaninol

人皮膚成纖維細胞;HSAS4L-色氨醇 質量規格:0.97L-Tryptophanol

HA Others H11N9 甲型 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-纈氨醇 質量規格:>98.5%,BRFmoc-Valinol

CL-0354HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞)5×106cells/瓶×2L-賴氨酸質量規格:HPLC98%,標準品L-Lysine

NOV Others Human CCN3 / NOV 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-賴氨酸質量規格:>98%,BRL-Lysine
CM-R067
大鼠腎足突細胞完全培養基100mL2-(5--2-偶氮)-5-(二乙基)本酚100毫克保存:-20

EC109,人細胞CBZ-D-纈酸 CBZ-D-Valine,99% 1685-33-2 5G 通用試劑

EB病毒轉化的人B細胞;KMY0926 人腦動脈平滑肌細胞完全培養基 100mL錄加醋異炳酯(30%的本,2mol/L)(+4) Isopropyl xlonofonmctq 108-3-6

大鼠肺泡巨噬細胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]動力-吲哚-尿素培養基基礎shēng huà shì jì容量:25

IL23R Others Rat 大鼠 IL23R / IL23 Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 79803-73-93-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸鈉 (MOPSO-Na)MOPSO wo7ium salt
犬鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒T細胞細胞;HuT 78洛沙坦Losartan Carboxaldehyde質量規格:美國進口

人卵巢成纖維細胞(HOF) ( 5×105 )N,O-(叔丁基二甲硅基)乙酰胺(>95.0%(GC))N,O-Bis(tert-butyldimethylsilyl)acetamide 質量規格:>95.0%(GC)

CM-R048大鼠腸巨噬細胞完全培養基100mL1-(二甲基異丙基硅基)咪唑(>98.0%(T))1-(Dimethylisopropylsilyl)imidazole質量規格:>98.0%(T)

小鼠色素瘤細胞;B16 小鼠肝實質細胞完全培養基 100mL1,3-(氯甲基)四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))1,3-Bis(chloromethyl)tetramethyldisilazane質量規格:>95.0%(GC)

MA, 小鼠星形膠質細胞 Mouse1,3-二苯基四甲基二硅氮烷(>95.0%(GC))Tetramethyl-1,3-diphenyldisilazane質量規格:>95.0%(GC)


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